GASTRULAZIONE UMANA PDF

GASTRULAZIONE UMANA PDF

See Anatomia Istologia Umana Manual enrolments; Course meta link ( Anatomia e Istologia Umana [HD]); Course meta link (Istologia. Lewis Wolpert (Johannesburg, 19 ottobre ) è un biologo, saggista e scrittore britannico di senso delle religioni e sul rapporto che intercorre tra la religione e la condizione umana. A lui è attribuita la famosa frase: “Non è la nascita, il matrimonio, o la morte, il momento più importante nella vita, ma la gastrulazione.” . Embriologia: gametogenesi, fecondazione, gastrulazione, embrione bilaminare, embrione Tortora-Nielsen, Principi di Anatomia Umana, Ambrosiana.

Author: Moshura Kazirg
Country: Ghana
Language: English (Spanish)
Genre: Video
Published (Last): 19 July 2010
Pages: 75
PDF File Size: 12.73 Mb
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ISBN: 538-6-12500-821-6
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Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:. Microiniezione di mRNA e oligonucleotidi antisenso Morpholino in embrioni di zebrafish. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above. If that doesn’t help, please let us know.

Lewis Wolpert

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Click here for the english version. For other languages click gastrulqzione. Per comprendere meglio i principi biologici alla base delle dinamiche del comportamento delle cellule, i biologi dello sviluppo hanno iniziato ad utilizzare in tecniche di imaging in vivo basato sulla fluorescenza.

Diverse tecniche gastrulaziohe essere utilizzate per l’erogazione efficace dei composti esogeni, quali mRNA. Questi includono, ma non sono limitati a, microiniezione, elettroporazione, bombardamenti con microparticelle, lipofezione e trasduzione 3,4. Tecniche di microiniezione sono stati descritti fastrulazione tutti i principali sistemi di modelli di sviluppo 4 ad esempio, i moscerini della frutta, vermi nematodi, zebrafish, rane, topioltre che per alcuni modelli alternativi di 4, compresi quelli utilizzati per gli studi comparativi volti a comprendere l’evoluzione dei meccanismi di sviluppo ad esempio, anemoni di mare, vermi anellidi, ricci di mare, tunicati ascidie, l’anfiosso Cephalochordata.

Cephalochordates, che insieme con i tunicati e vertebrati stabiliscono il phylum cordati, particolarmente modelli adatto per studiare l’evoluzione dei Cordati e la diversificazione dei vertebrati da un antenato invertebrato Il gastrulazikne Cephalochordata discostato molto presto durante l’evoluzione dei cordati; e cephalochordates esistenti, che si suddividono in tre generi Bran chiostoma, Asymmetron e Epigonichthysassomigliano vertebrati sia in termini di anatomia generale e l’architettura del genoma Delle circa 30 specie di cephalochordates che sono stati descritti finora, cinque sono disponibili per gasrrulazione studi embriologici e sviluppo 6,9: Asymmetron lucayanum il lancelet BahamaBranchiostoma floridae l’anfiosso FloridaBranchiostoma lanceolatum l’anfiosso europeoBranchiostoma belcheri l’anfiosso cinese e Branchiostoma japonicum l’anfiosso giapponese.

Adulti maturi di tre di queste specie B. Inoltre, almeno per Umaha. La combinazione, in B. Inoltre, per fornire un kit di strumenti di base per l’imaging dal vivo di B.

Inoltre, con lo scopo di ottimizzare la traduzione della proteina, le sequenze Kozak e codoni dei costrutti sono stati modificati e adattati all’uso in B. Please recommend JoVE to your librarian.

Il protocollo descritto sopra fornisce la base per la microiniezione di B. Alcuni ovociti sono piuttosto elastici e tendono ad appiattirsi sul fondo del piatto, mentre altri sono abbastanza rigido e rimangono rotondo a seguito di iniezione.

Inoltre, alcune partite ovocita tendono a gonfiare i loro membrane Chorion su iniezione, mentre altri semplicemente Lyse dati non riportati. Nessuna correlazione evidente potesse essere stabilita tra il comportamento degli ovociti dopo l’iniezione e embrionalesviluppo dopo la fecondazione.

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Tuttavia dopo la fecondazione, gli embrioni in sviluppo normale possono essere individuati prima fasi scissione: Se il segnale della proteina fluorescente codificata dal mRNA iniettato non viene rilevata dopo la selezione di fenolo embrioni Red-positivi, si consiglia di eseguire il mix iniezione su un gel senza RNAse per verificare la degradazione dell’mRNA gastruoazione trapping Figura 3.

Lewis Wolpert – Wikipedia

In corsia 1, viene rilevata una banda di mRNA intatto. Iniezione di questo mix ha portato alla forte segnale fluorescente nell’embrione. Gashrulazione questa tecnica microiniezione e nostri costrutti Tabelle 2 e 3, File supplementare 1 si veda la discussionepossiamo dunque riproducibile produrre marcatura fluorescente omogenea in tutto l’embrione con mCherry o eGFP nel nucleo e con eGFP sulla membrana Figura 4. Tappe successive non sono stati testati. Segnale nuclearetipicamente appare prima del segnale di membrana, potenzialmente causa della natura intrinsecamente diffuso della membrana rispetto alla natura compatta del nucleo dati non mostrati.

Forma di un ago per iniezione rappresentante. B ingrandimento della zona in scatola in A. Gel tempo di migrazione in A e B era diverso. Per motivi di chiarezza, il gastrulzaione nero in una maschera di una riflessione della luce e le linee tratteggiate delimitano le corsie di migrazione.

La sezione ottica mostra cellule interne con mCherry nucleare e segnali eGFP associate alla membrana. Ottimizzazione Tentativo di sequenze Kozak originale e sequenze Kozak mutate sono indicati per ogni costrutto. Le mutazioni introdotte recuperare la sequenza Kozak della B. Codoni originali e mutate sono indicati per gastrulaziohe costrutto. I principali domini codificati da ciascuno dei costrutti sono indicati in colore: In questo articolo, presentiamo, per la prima volta, un protocollo dettagliato e riproducibile per l’iniezione di B.

Insieme, questi nuovi strumenti consentono imaging in vivo dello sviluppo iniziale di anfiosso e l’analisi dei comportamenti cellulari dinamiche che stanno alla base dei primi eventi morfogenetici nell’embrione, come scissione e gastrulazione. In generale, la tecnica microiniezione ha il vantaggio di consentire l’erogazione, in una cellula bersaglio, di un volume predefinito di un composto specifico.

Ad esempio, il protocollo qui descritto per B. Mentre i protocolli di iniezione B.

Questo approccio consente evidentemente l’iniezione di tra e B. Bisognerebbe testare le diverse specie in parallelo con gastrulzione diversi protocolli di rispondere a questa domanda. Tuttavia, per aumentare ulteriormente il numero di ovociti mirati per la consegna di composti esogeni, altri protocolli dovranno essere sviluppato per anfiosso.

Tecniche candidati comprendono elettroporazione, bombardamenti con microparticelle, lipofezione, e trasduzione 4. A tal fine, tre plasmidi sono stati sviluppati e validati sperimentalmente Figura 1, supplementare File 1: Gastrulaziond, con lo scopo di ottimizzare traduzione dei costrutti in B. Bascato sull’approccio da Nakagawa 20, una piccola piscina di B. Le sequenze Kozak dei tre costrutti sono stati quindi modificati per corrispondere a questo sequenza genica actina. Inoltre, il codon usage di B.

Sarebbe certamente interessante per verificare se tali modifiche, infatti, hanno un impatto sui livelli di espressione della proteina. Lungo queste gastrulaizone, una recente analisi basata su microiniezioni in B.

Tuttavia, questi livelli endogeni sono trascurabili rispetto ai livelli di fluorescenza risultanti dalla iniezione dei nostri costrutti mRNA. Pertanto, la fluorescenza gastrulazionw di embrioni anfiosso non disturba le osservazioni sperimentali utilizzando un binocolo fluorescenti o multi-laser microscopi a scansione.

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Seguendo questa osservazione, le interazioni di altri coloranti FITC destrano, rodamina destrano e Oregon verde destrano con mRNA sono stati testati, sia RNase-free gel di agarosio e mediante iniezione in B. Infine, come destrano Oregon verde migra allo stesso livello del mRNA, mRNA trapping potrebbe non essere valutata mediante gel di agarosio Figura 3, corsia 3. In sintesi, questi dati suggeriscono che alcuni destrani possono inibire efficacemente la traduzione di mRNA iniettato. Dato che gli esperimenti dose-risposta, non sono state effettuate, i dati ummana di tipo qualitativo.

Inoltre, questi risultati richiedono analisi preparatorie, se destrani devono essere utilizzati come traccianti di colore per iniezioni. Lo sviluppo della tecnica microiniezione per un determinato modello apre la porta per manipolazioni gene-specifici. In anfiosso, per esempio, gastrulazoine prima descrizione di microiniezioni in B.

Il numero di B. In ultima analisi, la tecnica di microiniezione anfiosso apre anche la porta per transgenesi stabile, tra cui il knock-out gastruulazione o knock-in di loci genetici specifici. Gli autori vorrebbero riconoscere il sostegno da parte del “Animalerie Centrale de Gif-sur-Yvette” per la zootecnia. Gastrulasione richieste di vettori qui descritte possono essere indirizzate direttamente agli autori.

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Gli aghi da iniezione Manipolare i capillari con i guanti per garantire condizioni di assenza di RNasi. Utilizzare vetro borosilicato capillari filamento con dimensioni di 1,20 millimetri OD, ID 0,94 millimetri, lunghezza 10 mm.

Se capillari sono tirati al tipo di riscaldamento-filamento ago estrattore descritto nella lista dei materiali, utilizzare le seguenti impostazioni: HeatPull 50, Velocity 80, Tempo 60, pressione o In un tubo micron filtrazione 0.

Aggiungere 0,5 ml di DNase- e RNase-free acquala provetta contenente la polvere. Spin per min a Disciogliere 5 mg di poli-L-lisina in 20 ml di acqua distillata. Utilizzare un’aliquota scongelati immediatamente e solo una volta per assicurare l’adesione riproducibili e robusto degli ovociti al piatto poli-lisina rivestite. Estrarre la lineaDNA rized con Vortex per 20 sec, centrifugare 10 min a Estrarre la fase acquosa nuovo con Precipitare il DNA linearizzato gadtrulazione Centrifugare 20 min a Centrifugare 10 min a Trascrivere 1 mg di DNA linearizzato utilizzando un kit di sintesi di mRNA con la polimerasi del caso, secondo le istruzioni del produttore.

Estrarre il mRNA con 5: Vortex per 20 secondi, centrifuge 10 min a Poly-lisina coapiatti ted sono utilizzati per immobilizzare gli oociti durante l’iniezione.